苦豆子内生真菌诱导子促进宿主生物碱合成关键酶基因表达的荧光定量PCR检测

• 作者: 吕苗苗 孙牧笛 张庆宸 李文学 胡丽杰 闫思远 顾沛雯
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光定量PCR 苦豆子 内生真菌诱导子 赖氨酸脱羧酶基因 氧化苦参碱
• 年，卷（期）: 2018,（19）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 4621-4627
• 页数: 7页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.19.024

摘要

目的 建立荧光定量PCR (qRT-PCR)检测苦豆子内生真菌诱导子促进宿主生物碱合成关键酶一赖氨酸脱羧酶(LDC)基因的表达的方法.方法 根据苦豆子LDC和Lectin基因序列设计目的基因引物QLDC-F/QLDC-R和内参基因引物Lectin-F/Lectin-R;以5倍梯度稀释的cDNA作为标准样品,建立目的基因QLDC-F/QLDC-R和内参基因lectin-F/Lectin-R的标准曲线,优化qRT-PCR反应体系与反应条件,分析比较半定量PCR与qRT-PCR的灵敏度;在苦豆子内生真菌NDZKDF13诱导子不同诱导时间下,高效液相色谱(HPLC)测定宿主氧化苦参碱(oxymatrine,OMA)的含量,qRT-PCR检测LDC基因的表达量,分析在内生真菌诱导下LDC基因与OMA合成积累的关系.结果 在qRT-PCR体系中cDNA质量浓度为200 ng/μL,退火温度为61℃时检测结果最好;构建的目的基因和内参基因标准曲线,其循环阈值与模板浓度均呈良好的线性关系,扩增效率都在99％以上,灵敏度是半定量PCR的25倍;在内生真菌NDZKDF13诱导子诱导作用下,宿主LDC基因的表达量在第6天达到峰值,为对照的25.58倍;OMA含量的增加滞后于LDC基因表达量的变化,在诱导子处理第9天达到最高峰.结论 成功将qRT-PCR技术应用于苦豆子的功能基因研究.通过对各种条件的优化探索,建立了准确和简单易行的检测苦豆子的功能基因表达的平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾沛雯	宁夏大学农学院	59	312	10.0	13.0
2	闫思远	宁夏大学农学院	9	6	2.0	2.0
3	李文学	宁夏大学农学院	8	11	2.0	3.0
4	孙牧笛	宁夏大学农学院	11	25	3.0	4.0
5	胡丽杰	宁夏大学农学院	6	8	2.0	2.0
6	张庆宸	山东大学药学院	4	13	3.0	3.0
7	吕苗苗	宁夏农林科学院植保所	2	5	2.0	2.0