敖汉细毛羊Hoxa5基因质粒的构建及在成纤维细胞中表达量的研究

• 作者: 刘开东 刘积凤 张梦瑶 杨峰 柳楠 贺建宁
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 质粒构建 成纤维细胞 Hoxa5质粒转染 RT-PCR Western Blot
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 25-29,35
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5基因的质粒及转染成纤维细胞后基因的表达量变化.试验以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊.首先,通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中Hoxa5基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Hoxa5基因片段、将得到的Hoxa5基因连接到pGM-T载体,构建pGM-T-Hoxa5重组质粒并转化大肠杆菌(E.coli DH5α感受态细胞提取质粒进行酶切鉴定.鉴定正确后构建pcDNA3.1-Hoxa5重组质粒,转化大肠杆菌(E.coli) DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的质粒pcDNA3.1-Hoxa5转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5基因在成纤维细胞中表达量的变化.结果显示,经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Hoxa5构建成功,并且转染成纤维细胞后Hoxa5基因的表达量明显升高,且转染组的表达量显著地高于对照组(P＜0.05).表明:成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5基因的质粒,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳楠	青岛农业大学动物科技学院	58	219	8.0	10.0
2	刘积凤	青岛农业大学动物科技学院	25	109	7.0	9.0
3	刘开东		16	47	5.0	6.0
4	贺建宁	青岛农业大学动物科技学院	32	104	6.0	8.0
5	张梦瑶	青岛农业大学动物科技学院	13	10	2.0	3.0
6	杨峰	内蒙古农业大学动物科技学院	8	18	2.0	4.0