单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光RPA检测方法的建立及应用

• 作者: 刘立兵 南汇珠 姜彦芬 孙晓霞 王建昌 王金凤 石蕊寒 耿云云
• 来源期刊: 现代食品科技
• 关键词: 单核细胞增生李斯特氏菌 real-time RPA hlyA基因 食品安全
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 213-218,98
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2018.8.031

摘要

本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法.基于LMhlyA基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃等温条件下20 min内完成扩增.该方法仅对LM基因组DNA为阳性扩增,对其它20种致病菌基因组DNA的扩增均为阴性;以LM纯培养菌液的基因组DNA进行10倍列梯度稀释,并以之作为模板,其灵敏性可达到5× 10-1 pg,与实验室已建立的real-time PCR方法一致.人工污染实验中,对于LM接菌量为3CFU/25g的羊肉和生菜样品,增菌14h即可通过建立的real-time RPA方法检出,与传统培养方法和real-time PCR检测结果均一致,但是前者所需时间明显少于后者.本文建立的LM real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,反应迅速,并能够摆脱对价格昂贵的荧光PCR仪和专业实验室的需求,可应用于食品突发事件中LM的现场快速检测,对保障我国食品安全具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王金凤		1	0	0.0	0.0
2	刘立兵		1	0	0.0	0.0
3	耿云云		2	2	1.0	1.0
4	石蕊寒		1	0	0.0	0.0
5	孙晓霞		1	0	0.0	0.0
6	南汇珠		1	0	0.0	0.0
7	姜彦芬		1	0	0.0	0.0
8	王建昌		1	0	0.0	0.0