大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中转染效率的测定

• 作者: 况春燕 刘兴德 刘姿麟 刘志琴 张璐 林慕之
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 瞬时感受器电位C离子通道4 shRNA 重组腺病毒载体 内皮祖细胞
• 年，卷（期）: 2018,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2709-2713
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 3942字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2018.20.018

摘要

目的 构建大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率.方法 针对大鼠TRPC4序列设计4个RNA干扰靶点序列并合成双链DNA oligo,连接入干扰载体后转入大肠杆菌感受态细胞,培养后挑取转化子进行PCR鉴定及测序比对.利用Admax包装系统获得重组腺病毒Ad-shRNA-TRPC4小量扩增并测定病毒滴度,检测重组腺病毒对TRPC4表达的影响,最后将获得的重组腺病毒转染EPCs,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪测定其转染效率.结果 4组干扰质粒经培养后的转化子中均有阳性克隆,且阳性克隆与设计的干扰靶点序列一致;4组目的质粒均可抑制TRPC4蛋白的表达,合成的Ad-shRNA-TRPC4病毒滴度为5×1010 ifu/mL;倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测重组腺病毒在大鼠EPCs的转染效率分别为(85.47±2.05)％和(67.27±2.94)％.结论 本实验成功构建Ad-shRNA-TRPC4载体,其在EPCs的转染效率高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘兴德	贵州医科大学附属医院心内科	29	84	7.0	8.0