利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立

• 作者: 刘亚敏 张桂强 王宇暄 王燕 苏文洲 郭奇峰
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: EID3 MCF-7细胞 Tet-on系统
• 年，卷（期）: 2018,（18）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2737-2740
• 页数: 4页
• 字数: 3234字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2018.18.009

摘要

目的 构建类E1A细胞分化抑制因子3(EID3)真核表达载体,并转染人乳腺癌细胞(MCF-7),建立Tet-on诱导表达的目的基因EID3的稳定转染细胞系.方法 应用PCR技术,得到目的基因EID3的cDNA,通过双酶切、胶回收方法纯化目的片段EID3.DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pLVu-Tight-Puro,经菌落酶切、电泳以及测序鉴定.将真核表达质粒pLVu-Tight-Puro-EID3和pLVX-Tet-On Advanced Vector转染MCF-7细胞,分别通过G418和嘌呤霉素选择培养,建立由四环素(doxycycline,DOX)诱导表达的稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测目的基因EID3在DOX诱导下mRNA以及蛋白的表达.结果 成功构建了pLVu-Tight-Puro-EID3表达质粒,并建立了由DOX诱导表达的稳定转染细胞系,可在DOX诱导下稳定表达EID3基因的mRNA及蛋白.结论 人EID3稳定表达细胞系为研究EID3基因在肿瘤辐射敏感性及药物敏感性的作用提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王燕	华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科	8	13	2.0	3.0
2	刘亚敏	华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科	6	2	1.0	1.0
3	王宇暄	华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科	1	0	0.0	0.0
4	张桂强	华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科	1	0	0.0	0.0
5	苏文洲	华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科	1	0	0.0	0.0
6	郭奇峰	华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科	1	0	0.0	0.0