脂肪干细胞结合电纺生物膜制备"三明治"样心肌片层

• 作者: 吴张松 朱红霞 朱艳霞 杨帆 林欣燕 潘婉淳 罗志强
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 生物材料 电纺生物膜 壳聚糖 胶原 细胞片层工程 心肌细胞 脂肪干细胞 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 材料生物相容性
• 页码范围: 254-260
• 页数: 7页
• 分类号: R318
• 字数: 7727字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0015

摘要

背景:越来越多研究表明,组织工程化心肌细胞片层可为心肌梗死后的细胞修复提供一种可靠的治疗方法.目的:以壳聚糖-胶原电纺膜作为支撑膜、脂肪干细胞作为种子细胞,构建"三明治"样多细胞片层.方法:制备壳聚糖与Ⅰ型鼠尾胶原质量比分别为7:3、5:5的壳聚糖-胶原电纺生物膜.将第4代脂肪干细胞接种于温敏培养皿培养3 d,分别加入两种壳聚糖-胶原电纺生物膜,20 ℃培养15 min;待细胞片边缘卷起后,将电纺膜及细胞片层一同移至另一脂肪干细胞生长完全融合的温敏培养皿表面,有细胞层一面朝上,培养30 min后,加入心肌细胞培养基进行培养.培养2周后,多光子显微镜观察细胞状态,免疫细胞化学、Western blot及流式细胞仪检测细胞心肌组织特异性肌钙蛋白TnI和缝隙连接蛋白Cx43的表达,实时定量PCR仪检测心肌细胞特异性基因表达.结果与结论:①细胞状态:7:3壳聚糖-胶原电纺膜不能为细胞增殖提供足够的空间,5:5壳聚糖胶原膜能为脂肪干细胞的附着和结构塑形提供更好的支持;7:3壳聚糖-胶原电纺膜组死细胞多于5:5壳聚糖-胶原电纺膜组;②TnI、Cx43蛋白表达:5:5壳聚糖-胶原电纺膜组细胞TnI、Cx43蛋白表达多于7:3壳聚糖-胶原电纺膜组(P < 0.05);③心肌细胞特异性基因表达:5:5壳聚糖-胶原电纺膜组细胞α-skA、β-MHC、TnI、Cx43、ANP、GATA-4和Nkx2.5 mRNA表达均高于7:3壳聚糖-胶原电纺膜组;④结果表明:5:5壳聚糖-胶原电纺膜作为支架有利于脂肪干细胞的增殖与分化,更适宜构建"三明治"样细胞片层.