茯苓酸对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞肥大和凋亡的影响及其机制的研究

• 作者: 吴青青 唐其柱 李芳芳 袁园
• 来源期刊: 广西医学
• 学科: 医学
• 关键词: 茯苓酸 H9c2细胞 血管紧张素Ⅱ 细胞肥大 细胞凋亡 c-Jun氨基端激酶
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 656-661
• 页数: 6页
• 分类号: R542.2|R34
• 字数: 5839字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11675/j.issn.0253-4304.2018.06.15

摘要

目的 探讨茯苓酸(PA)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的 H9c2细胞肥大和凋亡的影响及其机制.方法 H9c2细胞传代培养后,(1)将细胞分为空白对照组、0. 125 μmmol/L、2. 5 μmmol/L、5 μmmol/L、10 μmmol/L、20 μmmol/L PA处理组,PA处理组分别给予不同浓度PA干预,空白对照组加入等体积的培养液;(2)将细胞分为空白对照组、1 μmmol/L AngⅡ组、0.125 μmmol/L、2.5 μmmol/L、5 μmmol/L、10 μmmol/L PA联合1 μmmol/L AngⅡ处理组,药物干预组分别加入不同浓度的AngⅡ和PA,空白对照组加入等体积的培养液;(3)确定PA最佳给药浓度,将细胞分为空白对照组、1 μmmol/L AngⅡ组、0.125 μmmol/L、2.5 μmmol/L、5 μmmol/L PA加1 μmmol/L AngⅡ处理组;(4)确定后续实验最适宜的Ang Ⅱ刺激时间,将细胞分为1 μmmol/L Ang Ⅱ0 h、6 h、12 h、24 h组,5 μmmol/L PA+1 μmmol/L Ang Ⅱ0 h、6 h、12 h、24 h组;(5)细胞分为空白对照组、1 μmmol/L AngⅡ组和5 μmmol/L PA+1 μmmol/L AngⅡ组,处理时间为24 h.采用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测H9c2细胞的活性,实时定量PCR检测H9c2细胞中心房利钠肽(ANP)、B型钠利尿肽(BNP)和α肌球蛋白重链(α-MHC)mRNA的表达,α-actin免疫荧光染色观察H9c2细胞表面积,脱氧核糖核甙酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色观察H9c2细胞凋亡情况,免疫印迹法检测H9c2细胞中激活丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白和凋亡相关蛋白的表达.结果 (1)AngⅡ刺激12 h时,与0.125 μmmol/L、2.5 μmmol/L PA组相比,5 μmmol/L PA给药组ANP和BNP的mRNA表达明显升高,α-MHC的mRNA表达水平明显下降(P<0.05);与AngⅡ12 h组及AngⅡ24 h组比较,5 μmmol/L PA+1 μmmol/L Ang Ⅱ 12 h组及5 μmmol/L PA+1 μmmol/L Ang Ⅱ 24 h组H9c2细胞中ANP、BNP的mRNA表达水平均下降,α-MHC的mRNA表达水平升高(P<0.05).5 μmmol/L PA和Ang Ⅱ刺激24 h分别为该研究中筛选出的最佳给药浓度和最宜刺激时间.(2)与AngⅡ24 h组比较,5 μmmol/L PA+AngⅡ24 h组H9c2细胞表面积明显下降(P<0.05),细胞中细胞非信号调节激酶和P38的磷酸化水平无明显改变,但c-Jun氨基端激酶的磷酸化水平明显下降(P<0.05).(3)与AngⅡ24 h组比较,5 μmmol/L PA+1 μmmol/L AngⅡ24 h组H9c2细胞凋亡比例下降,且半脱氧酸天冬氧酸特异性蛋白酶(C-Caspase3)血管紧张素Ⅱ、C-Caspase9和B淋巴细胞瘤2相关X蛋白的蛋白表达明显下降,B淋巴细胞瘤-2蛋白表达升高(P<0.05).结论 PA可能通过抑制JNK减轻Ang Ⅱ诱导的H9c2细胞肥大和凋亡.