shRNA干扰肾癌细胞株786-O和OS-RC-2中HIF-2α的表达对VEGF的影响

• 作者: 卢建中 巩进伟 张效通 张正潮 李朝明 李烨 杨宁强 段建敏 王培龙 范康武 赵永录
• 来源期刊: 卫生职业教育
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 低氧诱导因子-2α 血管内皮生长因子 786-O细胞 OS-RC-2细胞
• 年，卷（期）: 2018,（17）
• 所属期刊栏目: 临床实践
• 页码范围: 144-148
• 页数: 5页
• 分类号: R737.11
• 字数: 5768字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建在哺乳动物细胞中表达的低氧诱导因子-2(HIF-2α)的短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,在体外模拟肿瘤常氧和低氧环境下研究对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.探讨HIF-2α、VEGF两者之间及其与肾透明细胞癌(CCRCC)的关系,HIF-2α可能为CCRCC潜在的新效靶.方法 构建HIF-2αshRNA真核表达载体质粒,shRNA测序鉴定.150 umol/L氯化钴(CoCl2)模拟细胞低氧环境.设对照组(空白、阴性)和实验组.空白对照组不做转染,阴性对照组转染空质粒,实验组转染HIF-2αshRNA重组质粒,每组均设置常氧和低氧环境组.采用Real time-PCR技术检测786-O和OS-RC-2细胞中HIF-2α基因表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测VEGF蛋白表达情况.结果 DNA测序证实重组质粒构建成功,shRNA转染786-O和OS-RC-2细胞,实验组中HIF-2αmRNA表达明显受到抑制,且常氧较低氧环境下HIF-2αmRNA表达降低,低氧环境下凋亡显著;常氧和低氧环境下,实验组VEGF蛋白表达量均下降,且常氧环境下蛋白表达下降明显.结论 低氧环境下,HIF-2αmRNA表达量升高,促进VEGF蛋白表达.干扰HIF-2α基因后,细胞凋亡率升高,抑制VEGF蛋白表达. 该基因可能为治疗CCRCC提供了新的效靶,为下一步实验鉴定奠定基础.