双基因重组载体对乙醇作用下兔干细胞增殖与成骨活性的影响

• 作者: 刘柯希 李劲峰 李月白 王义生
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 双基因重组载体 乙醇 干细胞 增殖 成骨活性 兔
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 877-880
• 页数: 4页
• 字数: 3247字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2018.05.025

摘要

目的 观察双基因重组载体对乙醇作用下兔干细胞增殖与成骨活性的影响.方法 取第3代兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),随机分为6组:(1)正常组:正常培养BMSCs,无基因转染;(2)模型组:无基因转染BMSCs;(3)无关序列组:10μl无关序列载体转染BMSCs;(4)沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ (siPPARγ)组:10μl siPPARγ基因载体转染BMSCs;(5)表达降钙素基因相关肽(exCGRP)组:10μl CGRP基因载体转染BMSCs;(6)双基因组:10μl双基因重组载体转染BMSCs.除正常组外,其余各组细胞给予终质量浓度0.09 mol/L乙醇.采用噻唑蓝(MTT)法检测BMSCs增殖,第14天检测各组细胞内碱性磷酸酶活性、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原、培养基中骨钙素含量,并作碱性磷酸酶(ALP)染色.结果 双基因组细胞增殖明显,增殖曲线接近于正常组.细胞中ALP活性、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原、培养基中骨钙素含量:双基因组数值最高,分别为(18.593±2.350) U/L、(24.422 ±3.110) ng/ml、(5.951 ±0.650) μg/L、(5.836 ±0.630) ng/ml,显著高于模型组[(6.528 ±0.830) U/L、(9.422±1.250) ng/ml、(1.733±0.230) μg/L、(2.016 ±0.240) ng/ml]、无关序列组[(7.011±0.850) U/L、(9.693±1.260) ng/ml、(1.663 ±0.220) μg/L、(1.913±0.230) ng/ml],明显高于siPPARγ组[(13.536 ±1.710) U/L、(17.103±2.230) ng/ml、(3.486±0.410) μg/L、(3.686±0.420) ng/ml]、exCGRP组[(13.692 ±1.760) U/L、(17.185 ±2.240) ng/ml、(3.525±0.420) μg/L、(3.833±0.430) ng/ml]、正常组[(15.056±1.910) U/L、(18.528±2.430) ng/ml、(4.035±0.460)μg/L、(4.012±0.460) ng/ml],差异均有统计学意义(均P=0.000).模型组、无关序列组数值显著低于正常组,差异均有统计学意义(均P=0.000).siPPARγ组、exCGRP组数值略低于正常组,差异均无统计学意义:ALP活性(P=0.222、0.274),层粘连蛋白(P =0.362、0.390),Ⅰ型胶原(P=0.082、0.105),骨钙素(P =0.276、0.543).双基因组数值显著高于正常组,差异有统计学意义:ALP活性(P=0.031),层粘连蛋白(P=0.010),Ⅰ型胶原、骨钙素(均P =0.001);且明显高于siPPARγ组、exCGRP组,差异均有统计学意义:ALP活性(P =0.005、0.006),层粘连蛋白(P=0.003、0.003),Ⅰ型胶原、骨钙素(均P=0.000).ALP染色显示:双基因组中大量细胞胞质染色为深蓝色,且较正常组多.结论 双基因重组载体可以保持乙醇作用下兔干细胞正常增殖,显著促进成骨活性,优于单一基因作用.