Thoc1真核表达载体构建及其与ClC-3蛋白在人宫颈癌细胞HeLa中的共定位观察

• 作者: 何桂芳 刘学强 徐彬 王汝上 郑兆广 钟杰
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: Thoc1基因 真核表达载体 氯离子通道3 共定位 人宫颈癌细胞HeLa
• 年，卷（期）: 2018,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-29
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 3119字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2018.16.007

摘要

目的 克隆Thoc1基因并构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体,观察Thoc1和氯离子通道3(ClC-3)在人宫颈癌细胞HeLa中的共定位情况,分析ClC-3是否参与细胞转录过程.方法 采用RT-PCR法扩增获得Thoc1基因的编码序列,将其克隆到pDsRed2-N1载体中,构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体,经PCR、SacⅠ和BamHⅠ双酶切、基因测序进行鉴定.将对数生长期 HeLa 细胞随机分为转染组、空转染组及空白对照组,分别采用Lipofectamine 2000转染pThoc1-DsRed2-N1质粒、pDsRed2-N1质粒及脂质体,转染48 h倒置荧光显微镜下观察红色荧光蛋白表达情况.取转染组细胞,采用免疫荧光技术观察Thoc1和ClC-3的共定位情况.结果 PCR鉴定结果显示在约2.1 kb处有一亮带;双酶切得到约4.7 kb和2.1 kb的两个片段,符合预期大小;基因测序结果显示与Genebank中Thoc1基因序列完全一致;证实成功构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体.空转染组可观察到较强的红色荧光,空白对照组没有观察到红色荧光,转染组红色荧光强度介于空转染组与空白对照组之间;证实HeLa细胞中存在Thoc1表达.ClC-3分布于细胞核和细胞质中,主要是细胞核中;Thoc1只分布于细胞核中;两者叠加后在细胞核呈黄色荧光,证实ClC-3和Thoc1在HeLa细胞核上存在共同定位.结论 成功构建了pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体;Thoc1与ClC-3共定位于HeLa细胞核,提示ClC-3可能参与细胞转录过程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王汝上	广州康臣药业有限公司肾病药物研究中心	19	71	4.0	8.0
2	郑兆广	广州康臣药业有限公司肾病药物研究中心	5	49	3.0	5.0
3	徐彬	广东药科大学生命科学与生物制药学院	5	1	1.0	1.0
4	刘学强	广东药科大学生命科学与生物制药学院	1	0	0.0	0.0
5	钟杰	广东药科大学生命科学与生物制药学院	2	0	0.0	0.0
6	何桂芳	广东药科大学生命科学与生物制药学院	1	0	0.0	0.0