破骨细胞酸性磷酸酶染色后快速半定量分析

• 作者: 何友华 李威 李明翰 杨德鸿 童国军 许伏龙
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: TRAP原位染色 冰醋酸 半定量分析 破骨细胞 甲状旁腺素
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1765-1768
• 页数: 4页
• 字数: 2189字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2018.12.004

摘要

目的 寻求合适的溶剂,溶解破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶( TRAP)染色产物,筛选溶液的最适检测波长,检测溶液吸光度值.比较该方法与TRAP活性检测试剂盒法相关性,并评价该快速半定量分析法的稳定性与可靠性.方法 提取C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs),以1 ×104· mL－1均匀种入胶原I包被处理24孔板,随机分为4 组:10 nmoL/L PTH(1－34),100 nmoL/L PTH(1－34),1 μmoL/L PTH (1－34),10 μmoL/L PTH(1－34),给予甲状旁腺素[PTH(1－34)]刺激4 h后换成含10%胎牛血清完全培养基培养44 h,以4 h/44 h为1个周期,培养8 d后,进行常规破骨细胞TRAP染色,筛选合适的溶剂溶解,最终使用冰醋酸溶解TRAP原位染色产物,超声粉碎取上清,选取合适的波长检测吸光度( OD)值,此为冰醋酸溶解定量法.另一检测手段为目前常规使用的酶活性检测试剂盒法,试比较冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法两者的相关性.结果 常规破骨细胞原位TRAP染色后,筛选出冰醋酸的溶解效果最优.溶解后测定波长在550 nm左右吸收峰理想,并排除溶剂冰醋酸本身的干扰.随着PTH(1－34)浓度增高,表现出破骨效应的增加,TRAP的活性增加,两者的OD值相应增加.冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法存在显著正相关,Pearson相关系数r＝0.986(P＜0.05).结论 采用冰醋酸溶解定量法,并用550 nm 波长测定 OD值,可实现破骨细胞TRAP染色后的快速半定量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨德鸿	南方医科大学南方医院脊柱骨科	39	201	8.0	12.0
2	李威	南方医科大学南方医院脊柱骨科	11	73	6.0	8.0
3	许伏龙	南方医科大学南方医院脊柱骨科	4	13	2.0	3.0
4	童国军	南方医科大学南方医院脊柱骨科	3	15	1.0	3.0
5	何友华	南方医科大学南方医院脊柱骨科	2	1	1.0	1.0
6	李明翰	南方医科大学南方医院脊柱骨科	2	1	1.0	1.0