移植PEDF-hUCMSCs在治疗大鼠视网膜色素变性的作用

• 作者: 旷龙昊 朱远飞 闫晓河 闻慧 阿洛丹
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 关键词: 色素上皮衍生因子 慢病毒载体 人脐带间充质干细胞 视网膜色素变性
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 1374-1380
• 页数: 7页
• 字数: 6948字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3980/j.issn.1672-5123.2018.8.04

摘要

目的:探讨移植色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor,PEDF)蛋白修饰人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUCMSCs)在治疗大鼠视网膜色素变性的作用.方法:分离和培养hUCMSCs,以PEDF重组慢病毒转染hUCMSCs.实验RCS大鼠(royal college of surgeon rat,RCS)随机分为3组干预,每组8只.实验组视网膜下腔注射PEDF-hUCMSCs;hUCMSCs对照组注射等量hUCMSCs,PBS对照组注射等量PBS.注射后4、8wk观察视网膜电图(electroretinogram,ERG),检测视网膜外核层厚度,观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)了解细胞的存活情况,通过视网膜切片免疫荧光染色观察其在体吞噬功能,通过MERTK蛋白的表达检测重建吞噬能力来评价疗效.结果:携带PEDF基因的重组慢病毒载体,能高效感染hUCMSCs,感染后的hUCMSCs进行传代培养,慢病毒可延长目的基因在细胞内的表达.移植后8 wk视功能上ERG中b波幅值实验组明显高于对照组,移植后4、8 wk形态学上视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)厚度实验组均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).移植后4、8 wk时GFP染色发现转染PEDF慢病毒的hUCMSCs细胞均能在视网膜下腔存活,视网膜切片行免疫荧光染色显示移植的PEDF-hUCMSCs对感光细胞脱落的外节碎片有吞噬作用.移植后4、8 wk时MERTK蛋白的表达检测实验组蛋白条带灰度值明显高于对照组,提示实验组中MERTK蛋白表达也明显增加,RPE重建吞噬能力提高.结论:移植PEDF蛋白修饰hUCMSCs对RCS大鼠视网膜有保护作用.