摘要:
目的 研究Snail家族转录因子-2(Snail2)的表达对人脑胶质瘤细胞U87替莫唑胺(TMZ)抵抗的影响.方法 体外分步诱导建立抵抗替莫唑胺细胞系(U87-TR),并通过噻唑蓝比色法(MTT)实验进行验证,逆转录聚合酶链式反应(RT-PC R)及免疫印迹(Western blot)法检测U87-TR与亲本细胞Snail2表达的变化.慢病毒转染干扰质粒降低U87-TR细胞系Snail2的表达,得到U87-TR-shSnail2细胞系,并通过RT-PCR及Western blot进行验证,MTT法检测U87-TR-shSnail2耐药能力的变化.结果 成功构建U87-TR细胞系,MTT结果显示U87-TR及U87细胞替莫唑胺IC50值分别为(19.73±1.34),(3.06±0.28) μg·mL-1,差异有统计学意义(P<0.05),U87-TR细胞耐药指数为6.45.Western blot结果显示,U87-TR及U87细胞Snail2蛋白相对表达水平分别为0.70±0.09及0.26±0.03,RT-PCR结果显示,U87-TR及U87细胞Snail2 mRNA相对表达水平分别为1.77±0.16及0.58±0.06,差异有统计学意义(P<0.05).U87-TR-shSnail2、U87及U87-TR细胞替莫唑胺IC50值分别为(8.61±0.74),(2.98±0.33),(17.20±1.09) μg·mL-1,U87-TR细胞显著高于U87-TR-shSnail2及U87细胞,且U87-TR-shSnail2细胞显著高于U87细胞,差异有统计学意义(P<0.05).U87-TR-shSnail2细胞及U87-TR细胞Snail2蛋白相对表达水平分别为0.15±0.02及0.53±0.06,U87-TR-shSnail2细胞显著低于U87-TR细胞,U87-TR-shSnail2细胞及U87-TR细胞Snail2mRNA相对表达水平分别为0.42±0.06及1.71±0.15,U87-TR-shSnail2细胞显著低于U87-TR细胞,差异有统计学意义(P<0.05),U87-TR-shSnail2耐药指数降低至2.90.结论 Snail2在抗替莫唑胺细胞系中高表达,且降低Snail2的表达能提高胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性,提示Snail2可能在胶质瘤细胞抗替莫唑胺发生的过程中发挥着重要作用.