阳春砂转录因子AvMYC4b的克隆及原核表达

• 作者: 杨锦芬 王虹 罗子俊 蒋研风羊 马东明
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 阳春砂 AvMYC4b 转录因子 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 1390-1397
• 页数: 8页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.06.024

摘要

目的 阳春砂是中药砂仁的主要来源植物,其转录组中己筛选出预测与萜类合成相关的候选转录因子unigene,对其进行克隆、序列分析和原核表达,以进一步认识阳春砂药效物质萜类合成的调控元件.方法 根据阳春砂转录组数据中预测为AvMYC4b的Unigene0074125序列设计特异引物,提取阳春砂叶片RNA并反转录成cDNA,以此为模板经PCR扩增得到AvMYC4b的核心片段,再通过RACE技术获得全长cDNA,然后进行编码区全长的GATEWAY TOPO克隆.通过LR反应构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta (DE3)细胞,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖在16℃下培养诱导融合蛋白表达,收集菌体,经过裂解、超声、纯化,用SDS-PAGE检测蛋白表达结果.结果 克隆获得的AvMYC4b全长有2 579 bp,包含195 bp的5'UTR,1 995bp的ORF和389bp的3'UTR,编码664个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为72 211.经过生物信息学分析,AvMYC4b氨基酸序列与其他植物的MYC相似,含有转录因子MYC家族的保守结构域,预测可定位于细胞核中.成功构建重组表达载体pDEST17-AvMYC4b并转化Rosetta (DE3)细胞,经诱导表达得到AvMYC4b融合蛋白,SDS-PAGE结果显示蛋白相对分子质量约80 000,与预测相符.结论 从阳春砂中克隆得到bHLH家族转录因子AvMYC4b,并建立了AvMYC4b原核表达系统,为该转录因子的生物功能研究奠定了基础.