α-L-鼠李糖苷酶以催化活性包涵体形式异源表达及其酶学性质

• 作者: 丁国斌 吉亚茹 张甜 李彬春 李艳琴
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: α-L-鼠李糖苷酶 催化活性包涵体 解肝磷脂土地杆菌 异源表达
• 年，卷（期）: 2018,（14）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 79-84
• 页数: 6页
• 分类号: Q814.2
• 字数: 5224字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201814012

摘要

从解肝磷脂土地杆菌(Pedobacter heparinus)基因组DNA扩增获得两个α-L-鼠李糖苷酶基因PhRha78E和PhRha78G,构建于表达载体pET-28a;将重组表达质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)进行异源表达,PhRha78E和PhRha78G以不溶性包涵体形式大量表达于沉淀中,每克菌体可分别获得0.42 g和0.39 g含目的酶包涵体的沉淀.酶活实验显示二者的不溶性包涵体具有催化活性,可以催化水解底物对硝基苯酚-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenol-α-L-rhamnopyranoside,PNPR),表明二者在大肠杆菌中以催化活性包涵体形式异源表达.PhRha78E和PhRha78G的最适反应pH值相近,分别为6.5和7.0,PhRha78E在酸性pH 4.8仍能保持62％酶活力,而PhRha78G在碱性pH 8.6依然保持72％酶活力;PhRha78E和PhRha78G的最适反应温度却相差很大,分别为60℃和40℃,PhRha78E在高温70℃条件下仍能保持69％酶活力,而PhRha78G在低温20℃条件下仍有43％酶活力;动力学常数kcat分别为0.18s-1和0.12s-1,Km分别为0.55 mmol/L和0.40 mmol/L.本研究揭示新型α-L-鼠李糖苷酶PhRha78E和PhRha78G在大肠杆菌中以催化活性包涵体形式异源表达,蛋白表达量大,二者酶学性质差异较大,可应用于不同的生物催化领域,并丰富了现有α-L-鼠李糖苷酶资源库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李艳琴	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	45	621	14.0	23.0
2	丁国斌	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	4	4	1.0	2.0
3	李彬春	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	11	48	4.0	6.0
4	吉亚茹	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	2	3	1.0	1.0
5	张甜	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	4	46	3.0	4.0