DKK1基因过表达慢病毒载体构建及其在大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12中的表达

• 作者: 仝书严 张才溢 李慧华 耿德勤 陈锐
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 肾上腺嗜铬细胞瘤 DKK1基因 PC12细胞
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 分类号: R736.6
• 字数: 3649字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2018.05.005

摘要

目的 构建DKK1基因过表达慢病毒载体,并探讨其是否能在大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12中高效、稳定表达.方法 PCR法扩增DKK1基因序列,将其转入质粒并整合到载体上,构建GV358-DKK1慢病毒表达载体;将构建成功的目的质粒和辅助包装质粒共转染293T细胞对慢病毒进行包装,荧光显微镜观察基因在293T细胞中的表达,用病毒梯度稀释法测定病毒滴度.将培养好的PC12细胞随机分为三组,空载体阴性对照组、PC12-DKK1组分别用制备的空载体慢病毒及GV358-DKK1颗粒进行感染,空白对照组常规培养.用qRT-PCR和Western blotting法分别检测PC12细胞中DKK1 mRNA与蛋白的相对表达量.结果 限制性内切酶鉴定及测序结果提示GV358-DKK1慢病毒表达载体构建成功,转染293T细胞获得高滴度的病毒.PC12-DKK1组DKK1 mRNA及蛋白相对表达量均较空载体组、空白对照组高(P均＜0.05).结论 DKK1基因过表达慢病毒载体构建成功,且其可在PC12细胞中稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	耿德勤		62	90	5.0	7.0
2	张才溢		4	1	1.0	1.0
3	陈锐		2	1	1.0	1.0
4	仝书严		5	12	2.0	3.0
5	李慧华		1	0	0.0	0.0