BMP-Smad信号通路在小鼠胚胎干细胞诱导分化成骨细胞方案优化中的应用

• 作者: 夏荃 蒋德菊 高巍 鲍倩
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 小鼠胚胎干细胞 BMP-Smad信号通路 诱导分化 成骨细胞
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 822-827
• 页数: 6页
• 字数: 5052字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2018.06.005

摘要

目的 利用BMP-Smad信号通路在成骨分化中的作用,筛选出较稳定且成骨率较高的小鼠胚胎干细胞体外定向诱导分化成骨细胞的方案.方法 小鼠胚胎干细胞经悬浮培养形成拟胚体(embryoidbodies, EBs),用胰酶消化成单个细胞接种至6孔板中,在EBs单细胞贴壁生长的第14～21天,A组(方案1)添加50 μg/mL维生素C +50 mmol/L β - 磷酸甘油 + 10-8mol/L地塞米松;B组(方案2)添加50 μg/mL维生素C + 10 mmol/L β - 磷酸甘油+ 1 μmol/L地塞米松;C组(方案3)添加50 μg/mL维生素C + 50 mmol/L β - 磷酸甘油+1 μmol/L地塞米松;D组为正常对照组,不添加诱导剂.各组均在在贴壁第7、14、21、28天检测碱性磷酸酶(ALP)活性,第22天用1％茜素红染色鉴定成骨细胞.采用荧光定量PCR(q-PCR)和Western blot检测BMP-Smad信号通路中的BMP2、BMPR2、Smadl和Smad5等关键mRNA和蛋白的表达组平.结果 与正常对照组相比,各组均在EBs贴壁第7天后ALP活力逐渐增强,且均在第21天增至最强.茜素红染色结果 显示,阳性细胞被染成橘红色、呈大小不等的结节状.计算成骨细胞诱导形成率,A组、B组、C组和D组成骨细胞形成率分别为15.34％、23.71％、29.12％和0.66％.Q - PCR和Western blot检测结果 显示,与正常对照组相比,各组BMP2、BMPR2、Smad1和Smad5的mRNA和蛋白表达水平有不同程度的升高和降低,其中C组(方案3)的BMP2、BMPR2、Smad1和Smad5的相对表达量均升高,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 添加50 |xg/mL维生素C +50 mmol/Lβ-磷酸甘油+ 1 μmol/L地塞米松的方案成骨细胞诱导形成率最多,可最大量诱导骨结节的形成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏荃	广州中医药大学中药学院	29	155	7.0	11.0
2	鲍倩	广州中医药大学中药学院	6	9	2.0	2.0
3	蒋德菊	深圳市龙岗中心医院妇产科	11	118	4.0	10.0
4	高巍	广州中医药大学中药学院	3	10	2.0	3.0