Bak1腺病毒表达载体的构建及对人成骨肉瘤细胞的影响

• 作者: 万雷 柴爽 王伟 王吉利 黄宏兴 黄红
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 人Bcl2拮抗1(Bak1)蛋白 重组腺病毒载体 人成骨肉瘤细胞MG63
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1332-1336
• 页数: 5页
• 字数: 3932字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2018.09.017

摘要

目的 构建人 Bcl2 拮抗1(Bak1)基因重组表达腺病毒 pAd-Bak1,并感染人成骨肉瘤细胞MG63建立过表达Bak1的细胞模型,检测其对细胞活性的影响.方法 利用qPCR扩增Bak1全长cDNA,利用穿梭质粒pENTER构建载有Bak1基因的重组穿梭质粒pENTER -Bak1,通过基因测序鉴定载体序列.将重组载体PmeⅠ线性化、脱磷酸化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAd-Amp的感受态BJ5183细胞中进行基因同源重组.将重组腺病毒质粒pAD-Bak1经PacⅠ酶切线性化后,用Lipofectamine 2000脂质体转染到HEK-293细胞中进行包装扩繁,荧光定量PCR法测定病毒滴度.感染MG63细胞,qPCR和Western blot检测Bak1的表达,MTT检测细胞活性.结果 测序及酶切验证 pENTER-Bak1构建成功. pAD-Bak1 感染MG63 细胞,qPCR检测到细胞中Bak1基因过表达(与NC对照组和空白对照组相比P＜0.01、P＜0.01),Western blot检测到细胞中Bak1蛋白过表达. MTT检测显示与 NC对照组相比,细胞活性减弱(P＜0.05).结论 成功构建了Bak1重组表达腺病毒,验证了其能够感染MG63细胞表达Bak1蛋白,证明了过表达Bak1可以减弱细胞的活性.为进一步研究Bak1的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宏兴	广州中医药大学附属骨伤科医院骨科	101	788	16.0	22.0
2	王伟	中国人民解放军广州疗养院理疗科	251	1011	16.0	24.0
3	黄红	广州中医药大学护理学院	43	333	10.0	16.0
4	万雷	广州中医药大学附属骨伤科医院骨科	63	287	10.0	14.0
5	柴爽	广州中医药大学第三临床医学院	17	71	5.0	8.0
6	王吉利	广州中医药大学第三临床医学院	15	62	5.0	7.0