加工番茄PVY N:O HC-Pro、STV RdRp酵母双杂交 诱饵载体的构建及自激活验证

• 作者: 周东 路遥 郑银英
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 加工番茄 PVY STV 酵母双杂交 自激活 诱饵载体
• 年，卷（期）: 2018,（17）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 49-52
• 页数: 4页
• 分类号: S641.201
• 字数: 3680字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2018.17.012

摘要

马铃薯Y病毒(potato virus Y,简称PVY)和南方番茄病毒(southern tomato virus,简称STV)是加工番茄上非常普遍的病毒,以从加工番茄cDNA文库中筛选与病毒功能蛋白互作的基因为目标,构建PVY HC-Pro、STV RdRp Cyto Trap酵母双杂交诱饵载体,为抗病基因的筛选工作奠定基础.通过PCR技术,扩增PVY HC-Pro、STV RdRp片段分别克隆到诱饵载体pSos,用酶切、测序结果正确的2个诱饵载体重组质粒转化酵母感受态cdc25H,进行自激活检测及毒性验证.将不同组合的酵母转化液涂布于SD/Glu(-UL)培养基(SD/Glu指含有葡萄糖的SD培养基,-UL指缺失尿嘧啶、亮氨酸2种氨基酸)平板上,于25℃培养4 d后,挑取3个单菌落分别划线于2个SD/Glu(-UL)和2个SD/Gal(-UL)培养基上,并分别置于25、37℃继续培养5 d.结果表明,在25℃培养条件下,SD/Glu(-UL)和SD/Gal(-UL)培养基上酵母菌生长正常;在37℃培养条件下,SD/Glu(-UL)培养基上无酵母菌的生长,SD/Gal(-UL)培养基上阳性组合酵母生长正常,阴性组合酵母均不生长.构建的pSos-HC-Pro、pSos-RdRp诱饵载体没有转录自激活活性和毒害作用,可用于Cyto Trap酵母双杂交系统.