牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的非融合表达及生物学活性分析

• 作者: 于晓甜 唐金宝 唐铭泽 杨洪鸣 王京红
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组牛肠激酶轻链 大肠杆菌 非融合蛋白 表达 包涵体 活性分析
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20190101

摘要

该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EKLC).利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D4K-EKLC并转化至E coli DH5α,37 ℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同浓度下的复性效率.复性后的目的蛋白经金属离子亲和层析纯化,并以EKLC自切方式移除重组EKLC的N-端6×His-D4K序列得到具有天然N-端氨基酸序列的EKLC,酶活性测定结果显示该研究所制备的重组EKLC高于商品化牛肠激酶.重组EKLC在大肠杆菌中非融合表达成功,为实现EKLC的经济、高效制备研究奠定了实验基础.