绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定

• 作者: 丁澦 任真 李益鹏 王紫英 胡业辉 陈勖
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 荧光蛋白 绿色荧光蛋白结合蛋白 纳米抗体 蛋白表达 蛋白纯化 微量热泳动
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 183-190
• 页数: 8页
• 分类号: Q513
• 字数: 4007字
• 语种: 中文

摘要

绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原核表达系统,然后通过Ni-NTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43 mg、纯度超过95％的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动(MST)和等温滴定量热(ITC)实验检测GBP1与7种不同来源荧光蛋白的亲和力.结果显示GBP1特异性地与源自Aequorea victoria的荧光蛋白及其衍生荧光蛋白相互作用,与RFP和Zoanthus GFP等无相互作用.GBP1与EGFP和sfGFP的亲和力最高,与YPet和T-Sapphire的亲和力稍弱,与CyPet的亲和力最低.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李益鹏	复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系	3	1	1.0	1.0
2	丁澦	复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系	7	1	1.0	1.0
3	胡业辉	复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系	1	0	0.0	0.0
4	王紫英	复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系	1	0	0.0	0.0
5	陈勖	复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系	1	0	0.0	0.0
6	任真	复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系	1	0	0.0	0.0