美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析

• 作者: 刘子欢 常梦颖 张雅昆 徐畅 赵丹 郭巍 陆秀君
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 美国白蛾 氨肽酶N Bt蛋白 配体印迹
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 24-31
• 页数: 8页
• 分类号: S888.739|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2019.01.004

摘要

美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫.为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列(GenBank登录号:KP053647).该基因开放阅读框为3 000bp,编码999个氨基酸,预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD和4.85.设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列,构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1,诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD.将苏云金杆菌Cry1Ac、Cry2Ab33和Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验,发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合,而不与Cry2Ab33、Cry1Ac发生特异结合,推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白.分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp34～Asp527和Leu563～Gln925的编码序列,在大肠埃希菌中表达获得62 kD和48 kD 2种重组蛋白,体外结合试验显示Cry9Ea6与HcAPN1的结合发生在Leu563 ～ Gln925之间.研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆秀君		48	358	12.0	15.0
2	郭巍		30	143	7.0	10.0
3	赵丹		63	152	7.0	9.0
4	刘子欢		5	19	3.0	4.0
5	张雅昆		6	20	2.0	4.0
6	徐畅		3	0	0.0	0.0
7	常梦颖		3	1	1.0	1.0