一株新的大口黑鲈弹状病毒(YH01)的分离、鉴定及其糖蛋白的杆状病毒表达系统的构建

• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 学科: 农学
• 关键词: 大口黑鲈 弹状病毒 糖蛋白 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 页码范围: 728-739
• 页数: 12页
• 分类号: S91
• 语种: 英文

摘要

目的:探究大口黑鲈弹状病毒株与其他已知弹状病毒的差异,构建该病毒糖蛋白的杆状病毒表达系统,用于后续口服疫苗的研发.创新点:基于获得的大口黑鲈弹状病毒的全基因组序列,并利用杆状病毒表达系统获得了高丰度的病毒糖蛋白,可结合家蚕用于后续口服疫苗的研发.方法:利用cDNA末端快速扩增法(RACE)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术获得了病毒的部分序列,拼接获得了病毒的全基因组序列.通过ClustalW比较该病毒与已知弹状病毒的3'leader及5'trailer序列差异,进一步利用MEGA软件比较该病毒全基因组序列与其他鱼类弹状病毒的差异,确定其系统进化树中的分支及地位.基于糖蛋白序列分析结果,利用杆状病毒表达载体构建该病毒的糖蛋白表达系统,感染昆虫卵巢细胞(SF9)后,借助荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫荧光及蛋白质印迹法(western blot)等技术确定病毒增殖及糖蛋白的表达情况.结论:该大口黑鲈弹状病毒株全长11526 bp,且与鳜鱼弹状病毒为同一分支,属于水泡病毒属.构建的病毒糖蛋白杆状病毒表达系统成功在SF9细胞中表达了高丰度的糖蛋白.