基于qPCR和LAMP技术的马铃薯晚疫病菌快速检测方法

• 作者: 唐唯 张佩 林桐司骐 梁静思 王伟伟 祝菊澧 苏瑞 谢欣娱
• 来源期刊: 作物杂志
• 关键词: 定量PCR(qPCR) 环介导等温扩增(LAMP) 马铃薯晚疫病菌 潜伏侵染 检测
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 168-176
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16035/j.issn.1001-7283.2019.06.027

摘要

马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)能侵染多种茄科植物,它引起的马铃薯晚疫病,是马铃薯生产中的第一大病害.为了开发能在田间快速检测马铃薯晚疫病痛原的方法,利用P.infestans T30-4基因组测序数据的contig 1.18131,设计qPCR和LAMP引物,优化扩增条件后得到引物的特异性和灵敏度,最后通过检测田间收获薯块,比较形态学传统方法、qPCR及LAMP的差异.特异性检测结果发现,qPCR和LAMP仅在含有P.infestans DNA模板的体系有阳性扩增,在寄主和其他微生物DNA中均无扩增;在优化的条件下,qPCR和LAMP的检测下限可达1×10-6ng/μL,在有寄主和其他微生物DNA存在的条件下,引物的灵敏度没有显著差异.利用两种快速方法对在大理、丽江及昆明3个地区田间收获薯块上检测发现,qPCR和LAMP方法得到的检出率差异极为不显著(P=0.420),两种快速检测方法和形态学鉴定方法检出率差异极显著(P=0.009).在大理、丽江及昆明3个地区的薯块中,两种分子检测方法检出率均比形态学方法高.其中,qPCR检测方法比形态学方法分别提高了12.00％、2.00％、8.70％;LAMP检测方法比形态学方法分别提高了11.30％、2.00％、8.70％.