半滑舌鳎创伤弧菌分离鉴定及其荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 刘小雪 吕爱军 孙敬锋 宋亚娇 廉正义 王庆奎 王英杰 胡秀彩
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 半滑舌鳎 创伤弧菌 组织病理 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 页码范围: 1359-1368
• 页数: 10页
• 分类号: Q93-331|S941.42
• 字数: 6373字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20181011505

摘要

为确定患病半滑舌鳎的病原,从其体内分离到3株革兰氏阴性菌,将其分别命名为ST-1、ST-3和ST-6,进行细菌理化特性、药敏试验、16S rDNA测序以及组织病理学观察等方面的研究,并建立了外膜蛋白(OMP)基因的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法.结果显示,3株分离菌株的理化特性符合创伤弧菌特征,16S rDNA与创伤弧菌标准菌株ATCC29307序列相似性达99％以上,系统发育树分析显示,3株分离株与创伤弧菌自然聚为一支,最终鉴定为创伤弧菌;药敏试验显示,3株菌对头孢克肟、头孢哌酮、链霉素、亚胺培南和氟苯尼考等药物高度敏感.人工回归感染试验表明,分离株具有致病性,且半滑舌鳎、斑马鱼的临床症状与自然患病鱼症状相似;组织病理学观察显示,鳃丝上皮细胞增生,鳃小片肿胀黏连、颗粒细胞和黏液细胞增多,肝脏中央静脉淤血,肾脏出血、坏死,肠道黏膜固有层萎缩、黏液细胞增多等.进一步建立OMP基因的荧光定量PCR方法,结果显示,标准曲线的相关系数为0.995,检测下限为1.88×102 CFU/mL.以上结果可为半滑舌鳎弧菌病的致病机理、分子诊断和防治提供科学参考.