中国蓝舌病病毒血清5型毒株的分离与鉴定

• 作者: 孟锦昕 宋建领 寇美玲 廖德芳 李华春 李占鸿 杨恒 肖雷 高林
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 蓝舌病病毒 血清5型 分离 鉴定 序列分析 生物特性
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 36-43
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0216

摘要

为掌握我国云南省蓝舌病病毒(BTV)的流行情况,笔者在云南省师宗县设定哨兵动物,定期从哨兵动物上采集血液进行BTV分离.2012年笔者通过“鸡胚-C6/36细胞-BHK细胞”接种的方式从哨兵牛上分离出1株BTV(毒株号:V084/YN/2012),电镜观察显示,病毒粒子无囊膜,直径约80 nm,表面分布有纤突.血清中和试验表明,分离的病毒为蓝舌病病毒血清5型(BTV-5),使用抗BTV-5型的多克隆抗体为一抗进行间接免疫荧光染色,进一步证实分离毒株为BTV-5型.设计特异性引物对V084/YN/2012毒株的Segment 2(Seg-2)与Segment 3(Seg-3)的ORF区进行RT-PCR扩增与克隆测序,序列分析结果显示,V084/YN/2012与BTV-5型参考毒株(RSArrrr/05)的Seg-2核酸序列相似度为95.4％,在系统发育树上聚为一簇,属Seg-2基因E型;Seg-3在系统发生树上属Eastern topotype型,与中国BTV-4型YTS4毒株聚为一簇,核酸序列相似度高达97.5％.病毒蚀斑与增殖曲线测定试验表明,V084/YN/2012与实验室保存的BTV-5型参考毒株(RSArrrr/05)在BHK21细胞上可形成形态大小相近的病毒蚀斑,二者在BHK21细胞上的增殖特性也基本一致.本研究确认了BTV-5型V084/YN/2012毒株在我国的分离,掌握了病毒Seg-2与Seg-3基因的遗传特征以及病毒在BHK21细胞上的增殖特性.研究结果为进一步开展中国BTV-5型的基因组测序、流行病学调查与致病性研究奠定了基础.