小干扰RNA通过沉默Rhc糖蛋白调节血氨研究

• 作者: 卢再鸣 孙晨 赵骥越
• 来源期刊: 创伤与急危重病医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肝性脑病 氨转运体 Rhcg 小干扰RNA 基因沉默
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 16-19
• 页数: 4页
• 分类号: R575
• 字数: 4354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16048/j.issn.2095-5561.2019.01.05

摘要

目的 观察小干扰RNA通过沉默Rhc糖蛋白调节血氨的效果,为肝性脑病的靶向药物治疗提供依据.方法 培养原代小鼠脑微血管内皮细胞,用阳离子脂质体将小干扰RNA序列Rhcg-Mus-455、Rhcg-Mus-607、Rhcg-Mus-883转染进小鼠脑微血管内皮细胞中,提取并转染细胞蛋白与RNA,行蛋白质免疫印迹实验与琼脂糖凝胶电泳实验,观察细胞内氨转运蛋白及其mRNA的表达情况,以此观察小干扰RNA对细胞Rhcg基因的沉默效果与沉默效率,筛选出能够高效抑制小鼠脑微血管内皮细胞中氨转运体基因的小干扰RNA序列.结果 蛋白质免疫印迹实验中,3个小干扰RNA序列Rhcg-Mus-455、RhcgMus-607、Rhcg-Mus-883的Rhcg蛋白水平两两比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但Rhcg-Mus-455、Rhcg-Mus-607、RhcgMus-883的Rhcg蛋白水平均低于生理盐水与阴性对照,差异有统计学意义(P＜0.05).琼脂糖凝胶电泳实验中,3个小干扰RNA序列Rhcg-Mus-455、Rhcg-Mus-607、Rhcg-Mus-883的Rhcg mRNA水平两两比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但RhcgMus-455的Rhcgm RNA水平低于生理盐水与阴性对照,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 3个小干扰RNA序列对小鼠脑微血管内皮细胞中的氨转运体均有沉默表达作用,其中,小干扰RNA序列Rhcg-Mus-455具有更高的沉默效率.因此,通过基因沉默技术,在体外找到能够特异性结合氨转运蛋白的小干扰RNA,可抑制血氨转运,进而改善肝性脑病.