大肠杆菌-类中性粒细胞-金属片共培养模型的构建

• 作者: 何人可 朱崇尊 杨闯 汤瑾 沈灏 郭阁永
• 来源期刊: 中华关节外科杂志（电子版）
• 关键词: 假体相关感染 大肠杆菌 荧光 中性粒细胞
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 64-72
• 页数: 9页
• 字数: 7714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-134X.2019.01.013

摘要

目的 建立稳定发光的类中性粒细胞-大肠杆菌-金属片双荧光三相共培养动态模型,并研究其可行性和应用价值.方法 抽提pUC57-mCherry质粒,电转入大肠杆菌临床株ST131,构建稳定发光的ST131-mCherry大肠杆菌.通过活体成像(IVIS)系统对构建的ST131-mCherry大肠杆菌进行筛选.通过稀释涂板法比较ST131-mCherry与ST131的生长曲线,通过结晶紫染色比较ST131-mCherry与ST131的生物膜形成能力.将ST131-mCherry与钛片共培养,荧光显像观察不同时间点成膜情况,并通过超声震荡稀释涂板法对钛片表面生物膜计量.采用全反式维甲酸(ARTA)诱导HL60-eGFP细胞分化为类中性粒细胞.使用诱导分化的HL60-eGFP细胞、ST131-mCherry与金属片共培养,构建双荧光三相共培养模型,通过荧光显微镜观察以及稀释涂板计数评价不同金属表面的类中性白细胞抗菌能力.使用独立样本t检验对OD值和活菌数等定量数据进行统计.结果 经临床株筛选,质粒电转获得红色荧光菌株"ST131-mCherry",在体外连续培养48 h,ST131-mCherry可稳定发光.ST131-mCherry与野生株ST131相比,两者的生长曲线没有统计学差异.在胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)中,ST131与ST131-mCherry生物膜结晶紫染色490nm的OD值分别为(1.04±0.06)和(1.04±0.05)(t=0.890,P>0.05);在0.5％葡萄糖胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSBG)中,分别为(1.55±0.06)和(1.49±0.17)(t=0.822,P>0.05);在10％滑液(SF)中,分别为(2.13±0.16)和(2.124±0.13)(t=0.833,P>0.05).ST131-mCherry可以在钛片表面成膜,其荧光强度随着成膜量的增加而变强.诱导分化的HL60-eGFP细胞、ST131-mCherry与钛片或钽片共培养结果显示,经过60 min的共培养,钽金属体系内的HL60-eGFP细胞能够吞噬更多的ST131-mCherry大肠杆菌,钛片体系和钽片体系内细菌存活率分别为(33±2.5)％和(15.7±1.2)％(t=10.47,P<0.01).结论 本研究成功构建了大肠杆菌-类中性粒细胞-金属片双荧光三相动态共培养模型,该模型是1种实用的PJI相关抗菌材料体外研究方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤瑾	上海交通大学附属第六人民医院检验科	31	444	12.0	20.0
2	沈灏	上海交通大学附属第六人民医院骨科	92	778	15.0	23.0
3	杨闯	上海交通大学附属第六人民医院骨科	6	4	1.0	1.0
4	朱崇尊	上海交通大学附属第六人民医院骨科	5	3	1.0	1.0
5	何人可	上海交通大学附属第六人民医院骨科	3	1	1.0	1.0
6	郭阁永	上海交通大学附属第六人民医院骨科	6	14	2.0	3.0