体外低浓度过氧化氢对人黑素细胞自噬水平的影响及自噬相关lncRNA的筛选

• 作者: 丁书红 侯晓媛 修艳燕 孙利 李雪 石家绮 赵文娥 鲁严
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 白癜风 黑素细胞 细胞黏附 自噬 氧化性应激 过氧化氢 微管相关蛋白质类 E-钙黏素 长链非编码RNA
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 383-388
• 页数: 6页
• 字数: 5224字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2019.06.003

摘要

目的 研究低浓度过氧化氢(H2O2)处理对人黑素细胞黏附功能及自噬水平的影响,并筛选自噬相关lncRNA.方法 从健康男性包皮环切术后获得的皮肤组织中分离、培养黑素细胞.对数生长期黑素细胞分为对照组(无H2O2处理)、H2O2组(400μmol/L H2O2处理)和H2O2+NAC组(4 mmol/L NAC预处理细胞2h,然后加入400 μmol/L H2O2).处理5d后,用免疫荧光检测上述各组黑素细胞E-钙黏素、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及p62表达,透射电镜观察细胞结构及自噬体,Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,运用基因芯片技术筛选自噬相关lncRNA.采用Graphpad Prism 6软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,并用Tukey检验进行两两间的多重比较.结果 共聚焦显微镜下,与对照组和H2O2+ NAC组相比,H2O2组黑素细胞E-钙黏素及LC3荧光强度均明显下降,而p62荧光强度增高,且电镜下H2O2组黑素细胞内自噬体数量减少.Western印迹结果显示,H2O2处理组黑素细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值(0.604±0.012)显著低于对照组(1.200±0.081,q=7.718,P＜0.01)及H2O2+NAC组(1.017±0.062,q=5.076,P＜0.05),同时其p62/β肌动蛋白值(0.881±0.079)显著高于对照组(0.456±0.121,q=4.847,P＜0.05)及H2O2+NAC组(0.492±0.049,q=4.439,P＜0.05).H2O2+NAC组与对照组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值及p62/β肌动蛋白值差异均无统计学意义(P＞0.05).基因芯片结果显示,与对照组相比,H2O2组中有18个自噬相关lncRNA与黑素细胞提前衰老有关,从中筛选出了明显上调的自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1(差异＞10倍).结论 低浓度H2O2可使黑素细胞E-钙黏素表达下降,降低黑素细胞自噬水平,上调自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲁严	南京医科大学第一附属医院皮肤科	89	552	12.0	20.0
2	李雪	南京医科大学附属妇产医院皮肤科	15	33	3.0	5.0
3	石家绮	南京医科大学第一附属医院皮肤科	3	2	1.0	1.0
4	孙利	南京医科大学第一附属医院皮肤科	4	7	2.0	2.0
5	赵文娥	南京医科大学分析测试中心电镜室	9	57	3.0	7.0
6	丁书红	南京医科大学第一附属医院皮肤科	3	3	1.0	1.0
7	侯晓媛	南京医科大学第一附属医院皮肤科	4	5	2.0	2.0
8	修艳燕	南京医科大学第一附属医院皮肤科	3	2	1.0	1.0