桑源阴沟肠杆菌LAMP检测方法的建立和应用

• 作者: 刘伟强 刘吉平 周轶楠 孙勋勋 易辉玉 杨宏宇 王亚洁 王狗旦 田铃 陈杰湖 黄志君
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 桑源阴沟肠杆菌 环介导等温扩增技术 检测
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 321-330
• 页数: 10页
• 分类号: S888.71|Q789|R446.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2019.03.002

摘要

桑源阴沟肠杆菌是引起桑树发生枯萎症状的重要病原之一.对桑源阴沟肠杆菌全基因组序列进行分析,得到桑源阴沟肠杆菌特异基因序列,并以该特异基因序列为靶序列,设计筛选合适的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物组,通过荧光扩增曲线法、PCR产物琼脂糖凝胶电泳法及PCR产物SYBR Green Ⅰ染色法3种判定方法优化反应体系,进而建立桑源阴沟肠杆菌LAMP检测技术和产品.采用Yt4引物组,在60℃、外内引物浓度比为1:10的最优反应条件下,桑源阴沟肠杆菌阳性质粒检测灵敏度为2.5×106拷贝/μL.在特异性实验中,桑源阴沟肠杆菌菌株的阳性反应能产生S型荧光扩增曲线,电泳法可得到梯形条带,染色法反应液变为绿色,而在其他供试菌株及阴性对照中均未发生这些现象.应用建立的LAMP检测法和普通PCR方法分别对来自4个不同地区的11个桑树枯萎症状样品进行同步平行检测,2种方法的检测结果一致,但LAMP检测法更简单、快捷和灵敏.建立的桑源阴沟肠杆菌LAMP检测方法,为桑源阴沟肠杆菌的快速检测及桑树枯萎病的诊断提供了新技术.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘吉平		73	759	15.0	25.0
2	黄志君		38	132	5.0	9.0
3	刘伟强		38	115	6.0	8.0
4	田铃		5	6	1.0	2.0
5	易辉玉		6	2	1.0	1.0
6	孙勋勋		5	1	1.0	1.0
7	周轶楠		3	0	0.0	0.0
8	杨宏宇		2	0	0.0	0.0
9	王亚洁		1	0	0.0	0.0
10	王狗旦		1	0	0.0	0.0
11	陈杰湖		1	0	0.0	0.0