一种优化的猪卵泡颗粒细胞分离方法及验证

• 作者: 施振旦 曲小露 李辉
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 颗粒细胞 FICOLL-Paque 细胞增殖 孕酮 免疫荧光染色 FSH受体
• 年，卷（期）: 2019,（23）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医与水产蚕桑
• 页码范围: 190-194
• 页数: 5页
• 分类号: S828.3
• 字数: 6122字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.23.045

摘要

目前,进行体外研究的卵泡颗粒细胞主要通过抽取卵泡液的方式获得.而笔者前期研究发现,通过该方式获得的颗粒细胞贴壁率低且活力差.为解决该问题,在抽取方式的基础上采用FICOLL-Paque分离液对细胞进行进一步纯化,并通过CCK-8、Western Blot、免疫荧光染色、QRT-PCR、ELISA等方法分别对纯化细胞的形态、增殖能力、激素分泌相关受体(FSHR、LHCGR)和基因(CYP19A1、CYP11 A1、StAR)的表达及激素分泌情况进行检测.结果 发现,经纯化的细胞贴壁能力、细胞形态和增殖能力明显改善,且各激素分泌相关基因都有表达;E2分泌量明显提高,而P4分泌明显降低.研究结果表明,经FICOLL-Paque分离液纯化后的猪卵泡颗粒细胞中黄体化的颗粒细胞被大部分清除,纯化后的细胞活力更好且更能体现出颗粒细胞的特性.