Atsttrin在大肠杆菌中的表达和条件优化研究

• 作者: 姜雅杰 张同存 王楠 王重喜 罗学刚 陈小颖
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Atsttrin颗粒蛋白 pgrn基因 大肠杆菌 表达 纯化 优化
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 289-295
• 页数: 7页
• 分类号: Q815
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20190402

摘要

Atsttrin是颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)的截断突变体,具有比PGRN更强的TNFα受体拮抗能力,从而可产生更显著的抗炎治疗效果.为了筛选出高表达Atsttrin原核表达系统,致力于为抗炎新药的开发奠定工作基础,故开展该研究.研究以人血管内皮细胞(HUVEC)的cDNA文库为模板,PCR克隆得到pgrn基因,进而通过重叠PCR成功扩增获得atsttrin目的基因.分别将atsttrin插入到pET-22b(+)、pGEX-6p-3和pET-40b(+)3个不同的表达载体上,并转化大肠杆菌BL21 (DE3)、Rosetta(DE3)得到6株表达菌株.通过测定各菌株蛋白表达量,E coli BL21(DE3)/pGEX-Atsttrin菌株中目的蛋白的表达水平最高.为进一步提高表达量,对诱导温度、诱导时期、诱导剂浓度和诱导时间进行了优化.实验结果表明诱导表达最佳条件为37℃培养到A600为1.0时加入终浓度为3 mmol/L的乳糖,30℃诱导培养12 h,在此条件下进行5L发酵罐诱导10 h后重组蛋白产量为550 mg/L.作者成功建立了Atsttrin的大肠杆菌表达系统,并对其表达条件进行了优化,从而为相关药物的开发奠定了工作基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗学刚		16	125	4.0	11.0
2	王楠		25	76	5.0	8.0
3	张同存		31	69	5.0	6.0
4	王重喜		1	0	0.0	0.0
5	姜雅杰		1	0	0.0	0.0
6	陈小颖		1	0	0.0	0.0