马疱疹病毒1型ORF30基因原核表达载体的构建

• 作者: 冉多良 刘建华 加尔肯 布力布力汗 库来汗·巴依多拉 艾海提·亚森
• 来源期刊: 草食家畜
• 关键词: EHV-1 ORF30基因 原核表达 载体
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 动物医学
• 页码范围: 25-29
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16863/j.cnki.1003-6377.2019.04.005

摘要

马疱疹病毒1型(Equid herpesvirus 1,EHV-1)是引起孕马流产的主要病原体之一,也与死胎、新生幼驹死亡、 青年马鼻肺炎以及一种名为马疱疹病毒性脑脊髓病(Equine herpesvirus myeloencephalopathy,EHM)的神经系统疾病有关.近些年来,EHM出现的频率越来越高,对养马业和赛马业的危害很大.最新研究结果显示,神经致病性毒株与编码病毒DNA聚合酶催化亚基的ORF30基因单核苷酸点突变有着很高的相关性.为了获得马疱疹病毒1型DNA聚合酶,并制备DNA聚合酶的多克隆抗体,本研究以EHV-1-XJ2015毒株基因组DNA为模板,扩增ORF30基因编码区,并连接于pMD19-T载体上,用BamHI和HindIII双酶切后,将酶切产物插入表达pET-28a(+)中,转化入大肠杆菌DH5感受态细胞,构建ORF30基因的原核表达载体pET-28a(+)-ORF30.通过酶切、PCR扩增和测序等方法对阳性重组质粒进行了鉴定.结果表明,构建的重组质粒pET-28a(+)-ORF30经BamhⅠ和HindⅢ双酶切后,经1％琼脂糖凝胶电泳,电泳结果与预期相符,表明目的片段成功插入载体pET28a(+)中.通过采用特异性引物对重组质粒pET28a(+)-ORF30进行PCR鉴定,产物经1％琼脂糖凝胶电泳观察,得到一条大小约1074bp的清晰条带,与目的基因大小相符,表明重组质粒pET28a(+)-ORF30构建成功.本研究为进一步探讨马疱疹病毒1型ORF30基因遗传变异对DNA聚合酶功能的影响奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冉多良	新疆农业大学动物医学学院家畜传染病实验室	125	564	11.0	18.0
2	刘建华	新疆农业大学动物医学学院家畜传染病实验室	45	92	6.0	7.0
3	加尔肯	新疆农业大学动物医学学院家畜传染病实验室	17	39	3.0	6.0
4	库来汗·巴依多拉		5	4	1.0	1.0
5	艾海提·亚森	新疆农业大学动物医学学院家畜传染病实验室	1	0	0.0	0.0
6	布力布力汗		1	0	0.0	0.0