定向进化CYP105D1酶提高l-THP转化活性研究

• 作者: 刘吉华 欧晨辉 沈辰 赵万里 郭蕊琳
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: CYP105D1 左旋四氢巴马汀 左旋紫堇达明 同源模建 分子对接 定向进化 定点饱和突变
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 296-300
• 页数: 5页
• 分类号: R282.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20190403

摘要

细胞色素CYP105D1是Streptomyces griseus ATCC 13273中生物转化左旋四氢巴马汀合成左旋紫堇达明的关键酶,课题组前期成功在原核体系中克隆了CYP105D1,实现了利用工程菌株生物转化合成制备左旋紫堇达明.但是,CYP105D1存在着转化活性低、酶稳定性差等缺陷,因此希望通过定向进化手段改造CYP105D1,提高左旋紫堇达明的产量.研究首先通过同源模建与分子对接的方法,预测了CYP105D1与底物相互作用的关键位点,然后选取了其中8个位点进行定点饱和突变.突变文库筛选结果与全细胞转化结果显示,突变体R98A-R99A的转化率提升至原先的1.48倍.研究通过对CYP105D1酶进行定向进化,成功提高了左旋紫堇达明的生物转化合成效率,并进一步揭示了CYP105D1与底物左旋四氢巴马汀的相互作用机制.