齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 万晴姣 乙引 刘倩 张宇斌 李欲轲 洪鲲 龚记熠
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 齿兰环斑病毒 RdRp 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• 页码范围: 20-26
• 页数: 7页
• 分类号: S432.41
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000240

摘要

采用RT-PCR法从感染齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)贵州分离物的苋色藜叶片中扩增出病毒的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列.测序结果显示,该保守片段长516bp,编码171个氨基酸残基.构建了该片段的原核表达载体pET32a-ORSV RdRp并转化BL21 (DE3)菌株,在25℃以0.4mmol·L-1IPTG诱导表达重组蛋白.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为36 kDa,与预测相符合.将该重组蛋白作为抗原免疫BABL/C小鼠,制备的多克隆抗体效价达1∶102400.间接ELISA结果表明,该多抗具有较强的特异性,能检测到ORSV感染的病叶汁液中的RdRp,而与其它感染4种同属或不同属病毒的病叶汁液不发生血清学交叉反应,本实验为进一步研究RdRp的结构和功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚记熠		26	33	4.0	5.0
2	乙引		194	1671	21.0	30.0
3	万晴姣		35	218	9.0	14.0
4	张宇斌		45	426	12.0	20.0
5	洪鲲		28	116	6.0	9.0
6	刘倩		4	3	1.0	1.0
7	李欲轲		13	17	2.0	3.0