ROCK1基因敲除 对乳腺癌细胞系迁移及侵袭的影响

• 作者: 岳文涛 滕宇 王子宇 王晓杰 赵晓婷 顾勐
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: Rho相关蛋白激酶1 CRISPR/Cas9 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 193-197,202
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 4646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2019.03.004

摘要

目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)系统在MCF-7乳腺癌细胞系中构建Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)基因敲除模型,研究ROCK1敲除对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响.方法:设计并合成靶向ROCK1的向导RNA(sgRNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR单载体慢病毒上,感染并筛选稳定细胞株,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力.结果:目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的GV392质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定ROCK1敲除的细胞株构建成功;ROCK1基因敲除后,与对照组细胞相比,其蛋白表达缺失.划痕实验结果显示ROCK1敲除细胞株24 h划痕愈合度为(60.600±0.047)％,对照组细胞划痕愈合度为(80.404±0.018)％,差异有统计学意义(P=0.003).Transwell实验结果显示ROCK1敲除细胞株在24 h的迁移细胞数为(271.3±5.0)个,对照组的迁移细胞数为(448.3±5.5)个;48 h的迁移细胞数在实验组和对照组分别为(1.7±2.9)个和(298.3±5.7)个,差异有统计学意义(P=0.000).结论:ROCK1基因敲除可明显抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力,提示ROCK1基因在乳腺癌侵袭和转移中可能发挥重要作用.