家蚕AGO1蛋白结合RNA的分离与鉴定

• 作者: 吕正兵 杨帆 盛清 聂作明 蒋彩英 马亚飞 高珍
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 BmAGO1蛋白 免疫共沉淀 AGO结合RNA miRNA靶基因
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 346-352
• 页数: 7页
• 分类号: S881.2+4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2019.03.005

摘要

RNA诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)核心蛋白为Argonaute (AGO)家族蛋白,作为miRNA及RNAi功能途径中的关键蛋白,能够结合miRNA和siRNA,降解靶标基因mRNA或抑制其翻译.因此,利用AGO蛋白抗体通过免疫沉淀分离其结合RNA是目前规模化分离鉴定miRNA及相关小RNA靶基因的重要方法.首先对家蚕AGO1基因进行克隆表达和抗体制备,用自制的兔多克隆抗体免疫沉淀家蚕组织内源BmAGO1蛋白,成功分离BmAGO1蛋白结合的RNA;同时在BmN细胞中采用6×His标签融合表达BmAGO1蛋白,用His单抗免疫沉淀His-BmAGO1蛋白,同样成功分离获得其结合RNA.qRT-PCR检测发现,BmAGO1蛋白结合的RNA中含有家蚕miRNA靶基因BmEm4的mRNA.研究结果为批量鉴定家蚕miRNA靶基因奠定了基础,同时也为深入研究BmAGO1蛋白在家蚕中的功能提供了依据.