靶向EGFR二聚化界面单链抗体的构建及表达

• 作者: 刘梦苗 李泽民 李黄金 温碧燕 祝贺 赵林 邓栩文 邱创楠
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 表皮生长因子受体 二聚化界面 单链抗体 肿瘤
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 122-126,198
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建靶向EGFR二聚化界面的单链抗体.[方法]构建单链抗体的基因并进行密码子优化, 克隆于表达载体p GAPZα-A和毕赤酵母X-33.镍柱纯化目的蛋白, 并对EGFR高表达细胞A431和EGFR正常表达细胞NIH-3T3进行体外抑制分析和抗磷酸化分析.[结果]纯化获得了分子量大小约29. 0 k Da的EGFR dimer Sc Fv蛋白.在48h体外抑制实验中, 534 nmol/L EGFR dimer Sc Fv对A431和NIH-3T3的抑制率分别为34. 92±1. 30％和5. 89±0.46％, 抑制作用与母本抗体相似.Western Blotting分析表明, EGFR dimer Sc Fv能显著抑制A431细胞EGFR磷酸化, 而对NIH-3T3细胞显著无抑制作用.[结论]初步验证了靶向EGFR二聚化界面的单链抗体作为新型抗体药物的可行性, 为后续研究奠定了基础.