带Flag标签的Sirt4真核表达载体的构建及功能验证

• 作者: 刘娟 张德宇 徐小洁 朱祥 杨旭辉 赵彩彦 马晓燕 马路园
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 HepG2 pcDNA3.0-Flag-Sirt4 细胞增殖 质粒 转染
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 37-41
• 页数: 5页
• 分类号: R735.7|R446.62
• 字数: 3212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.01.008

摘要

目的 构建带Flag标签pcDNA3.0载体的Sirt4真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞HepG2生长之间的关系.方法 以人卵巢文库为模板,采用PCR技术扩增出Sirt4的CDS区编码序列,将PCR产物插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞提取质粒,测序正确后将pcDNA3.0-Flag和pcDNA3.0-Flag-Sirt4分别转染肝癌细胞HepG2,Western印迹实验鉴定目的基因蛋白表达,CCK-8法、克隆形成实验测定其对肝癌细胞HepG2生长的影响,Transwell证明Sirt4对肝癌细胞HepG2体外侵袭能力的影响.结果 双酶切结果显示,pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功;Western印迹实验验证该基因蛋白成功表达;CCK-8法和克隆形成实验证明过表达Sirt4基因抑制HepG2细胞增殖,Transwell证明过表达Sirt4明显抑制HepG2细胞体外侵袭能力.结论 pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功,过表达Sirt4基因可抑制肝癌细胞增殖及体外侵袭能力,为进一步研究Sirt4在肝癌中的发生与发展奠定了基础.