大帽藓科植物ISSR-PCR反应体系优化

• 作者: 买买提明·苏来曼 张梅娟 沙伟 沙毕热木·斯热义力
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 大帽藓科 ISSR-PCR 正交设计 反应体系 优化
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 133-139
• 页数: 7页
• 分类号: Q781
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立大帽藓科ISSR-PCR实验最佳反应体系.[方法]提取大帽藓科的基因组DNA, 利用5因素4水平的正交设计实验方法对大帽藓科植物ISSR-PCR反应体系进行最佳反应体系的筛选.[结果]大帽藓科植物ISSRPCR的最佳反应体系为(20μL):即20μL体系中, PCR Buffer 2. 0μL、Mg2+2. 25 mmol/L, d NTP 0. 2 mmol/L, 引物0.65μmol/L, Taq DNA聚合酶0. 7 U, 模板DNA 10 ng.5个因素对该反应体系的影响顺序为:Mg2+＞引物＞ d NTP＞ Taq DNA聚合酶＞模板DNA.利用该体系, 在UBC808等13种引物中进行验证, 均能得到有效的扩增条带.[结论]通过对大帽藓科基因组DNA的提取及体系优化, 获得了大帽藓科植物最佳反应体系, 为后续应用ISSR技术鉴定大帽藓科种质资源以及遗传多样性研究奠定了基础.