环状RNA circ-SOD2对肠上皮屏障和溃疡性结肠炎的作用

• 作者: 叶磊 张育军 王婷婷 韩影 高芳芳
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 环状RNA circ-SOD2 肠上皮屏障 溃疡性结肠炎
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 805-812
• 页数: 8页
• 分类号: R574.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.19723/j.issn.1671-167X.2019.05.003

摘要

目的:探索溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)中环状RNA的表达谱改变,寻找在溃疡性结肠炎中表达发生明显异常的环状RNA,并探讨其对肠上皮细胞屏障功能的影响.方法:挑选5对UC患者炎症结直肠黏膜组织和正常黏膜组织进行环状RNA,芯片检测,筛选溃疡性结肠炎中表达发生改变的环状RNA.使用实时荧光定量PCR在30例UC患者炎症结直肠黏膜组织和正常黏膜组织中进一步验证表达发生明显上调的环状RNA circ-SOD2.使用炎症因子(LPS、TNF-α和IL1-β)刺激肠上皮细胞系Caco2、NMC460,检测circ-SOD2的表达改变.使用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检测circ-SOD2在UC肠黏膜组织中的细胞定位.构建并合成circ-SOD2过表达载体,将其转染至Caco2细胞后检测Caco2细胞的跨上皮细胞电阻、FITC-右旋糖酐透过率,使用Western blotting检测上皮细胞屏障相关蛋白的表达改变.结果:环状RNA芯片检测后,通过限定条件(差异倍数＞1.5,P ＜0.05),在溃疡性结肠炎受累的结直肠黏膜中共筛选出111个上调、153个下调的circRNA.限定筛选条件:(1)在circRNA表达谱芯片中原始信号值(raw data)＞100;(2)差异表达倍数＞2倍;(3)差异有统计学意义(P＜0.05),筛选出10个差异明显的circRNA,并最终锁定在UC炎症肠黏膜组织中上调倍数最高的circ-SOD2.进一步扩大样本量在30对溃疡性结肠炎患者炎症和正常肠黏膜组织中使用荧光实时定量PCR技术进行验证,发现circ-SOD2表达明显上调(P ＜0.001);使用LPS、TNF-α、IL1-β刺激Caco2、NCM460细胞后,发现circ-SOD2在刺激后1～7h的不同时间点均表达上调.荧光原位杂交实验表明circ-SOD2主要表达于肠黏膜组织的肠上皮细胞,而在间质和炎症细胞中表达较少.在Caco2细胞中过表达circ-SOD2后,跨上皮细胞电阻明显下降,FITC-右旋糖酐透过率明显上升,上皮细胞屏障分子闭合蛋白(claudin-8,CLDN-8)表达明显下降(P＜0.05).结论:溃疡性结肠炎中环状RNA表达出现明显异常,其中在UC中表达上调的circ-SOD2可减弱肠上皮屏障,进而可能导致溃疡性结肠炎发生.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张育军	北京大学人民医院中心实验室	24	162	9.0	11.0
2	王婷婷	北京大学人民医院中心实验室	25	160	6.0	12.0
6	叶磊	北京大学人民医院中心实验室	10	126	5.0	10.0
7	韩影	北京大学人民医院中心实验室	4	4	1.0	1.0
8	高芳芳	北京大学人民医院中心实验室	7	45	3.0	6.0