呼吸道合胞病毒M2-1蛋白Hep-2细胞稳定表达株的构建及其在呼吸道合胞病毒感染中的特点

• 作者: 刘倩 刘文宽 游爱萍 许多
• 来源期刊: 微生物前沿
• 学科: 医学
• 关键词: 呼吸道合胞病毒 M2-1蛋白 稳定表达细胞株 感染特点
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 页码范围: 154-164
• 页数: 11页
• 分类号: R73

摘要

目的:构建稳定表达呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1蛋白的Hep-2细胞,并分析稳定表达细胞株RSV感染的特点。方法:构建M2-1真核表达质粒,转染至Hep-2细胞。通过G418筛选阳性单克隆;RT-PCR、qRT-PCR以及Western blot鉴定,最终得到稳定表达株。通过MTT法分析细胞增殖特征;通过分析不同浓度RSV病毒感染Hep-2细胞与所构建的稳定表达株细胞后在状态、细胞病变(CPE)出现时间以及RSV基因组核酸产量分析比较RSV在两种细胞中的感染特点。结果:获得一株稳定表达M2-1蛋白的细胞Hep-2 2F5。该株细胞的生长速度高于原始细胞株。采用1000~10?2 TCID50 (E1~E6)的病毒滴度对Hep-2 2F5与Hep-2两种细胞进行感染发现,1000 TCID50 (E1)的滴度下,两种细胞均产生病变,但Hep-2 2F5细胞产生的病变更明显;100~10 TCID50 (E2~E3)滴度下RSV感染两种细胞,Hep-2 2F5细胞产生的病变更早且更明显;1~0.1 TCID50 (E4~E5)滴度下RSV感染两种细胞,Hep-2 2F5细胞产生少量病变,Hep-2则无明显病变。E1~E4滴度下攻毒12 h后,RSV在Hep-2 2F5细胞中的核酸定量平均值高于Hep-2细胞,E5~E6滴度下攻毒12 h两细胞均未检测到RSV病毒核酸;随着时间延长,E1~E2滴度感染后的Hep-2中RSV含量高于Hep-2 2F5,在E4滴度及以下,RSV在Hep-2 2F5中的增殖优于Hep-2。结论:成功构建稳定表达M2-1蛋白的Hep-2 2F5细胞株。该细胞株在RSV感染中更具敏感性,低滴度病毒感染的情况下,更早产生CPE效应,且病毒核酸的含量也较Hep-2高。