一种新型莱克多巴胺-蛋白质载体结合技术在侧向流试纸条检测动物饲料中莱克多巴胺含量中的应用

• 作者: Nanthika KHONGCHAREONPORN Nattaya NGAMROJANAVANICH Orawon CHAILAPAKUL Pattarachaya PREECHAKASEDKIT
• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 学科: 生物学
• 关键词: 克莱多巴胺 克莱多巴胺牛血清蛋白 曼尼希反应 侧向流检测 饲料添加剂
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 页码范围: 193-204
• 页数: 12页
• 分类号: Q81
• 语种: 英文

摘要

目 的:开发一种新型简单快速的克莱多巴胺-蛋白质载体结合方法,用于侧向流试纸条检测动物饲料.创新点:基于曼尼希反应的克莱多巴胺-牛血清蛋白(RAC-B SA)结合方法,具有一步性、简单、快速,且所需试剂少的优点.方 法:通过曼尼希反应产生RAC-BSA结合物,制备竞争型侧向流试纸条.将RAC标记于猪饲料中,以体积比10∶90的甲醇:电泳缓冲液作为提取缓冲液,在25 min内完成样品制备.通过裸眼观察定性评估RAC-BSA结合物的免疫应答以及检测灵敏性,通过智能手机和电脑软件(ImageJ)进行半定量分析.结 论:在最佳条件下,侧向流试纸条检测的检出限(LOD)在5 min裸眼评估下为1 ng/g;半定量分析中,其线性范围为0.075～0.750 ng/g,计算的LOD为0.10 ng/g,定量限为0.33 ng/g,且相关性较好(R2=0.992).回收率为96.4％～103.7％,同实验内及不同实验间的相对标准偏差为2.5％～3.6％.通过与酶联免疫吸附法对比,该侧向流试纸条检测结果具有较高的准确性和特异性.因此,通过曼尼希反应制备RAC-BSA结合物是一步的简单的结合法,可用于侧向流试纸条检测法.