PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒载体在293T细胞中的过表达分析

• 作者: 李翔 沈凌筠 陆霓虹
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: PCDH-His-LprA-FLAG 慢病毒 表达载体 构件 293T细胞 过表达
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 481-484
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20190603

摘要

构建PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体,同时分析其在293T细胞中的过表达.将结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的DNA当成分析模板,对结核分枝杆菌脂蛋白A(LprA)基因实施扩展处理.通过连接慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro的T4酶,塑造pCDH-LprA.采用PCR测序完成阳性克隆载体的检测;采用重组质粒以及协同质粒融合转染293T细胞包装病毒,获取慢病毒颗粒上清液,通过梯度稀释法完成病毒滴度的检测,采用Western blot对病毒在293T细胞基因的表达实施检测.成功塑造PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体.病毒侵染的293T细胞内PVRL-2的表达量提升了100倍,PPARa的表达量提升4.5倍.蛋白结构预测说明Necitn-2是包含信号肽的跨膜蛋白.PPARa表达量提升导致结核分枝杆菌相关基因的活化,提升机体免疫力,信号肽和跨膜结构说明LprA蛋白会同膜中蛋白受体融合,驱动下游脂代谢的信号通路.Mtb细菌的LprA脂蛋白能够控制巨噬细胞、促进细胞增长和吞噬能力.通常情况下,慢性病毒可以进行细胞侵染的种类较多,且慢病毒可以将表达载体整合到宿主细胞的基因组上,实现在宿主细胞上连续的目的基因表达.慢性病毒具有的这种特点被广泛应用于细胞体外实验中.因此将含有毒性的Mtb因子当成治疗结核病的疫苗,为结核病的治疗提供了可靠的分析依据,将LprA当成预防以及治疗结核病的药物靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈凌筠		6	6	2.0	2.0
2	陆霓虹		26	160	8.0	12.0
3	李翔		6	2	1.0	1.0