固氮菌(Ensifer meliloti 1021)降解苯甲腈及其代谢酶的基因克隆和表达

• 作者: 戴亦军 葛峰 赵云岫 郭磊磊 郭静静
• 来源期刊: 生态与农村环境学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 固氮菌 腈水合酶 酰胺酶 苯甲腈 微生物降解
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 污染控制与修复
• 页码范围: 248-254
• 页数: 7页
• 分类号: Q814
• 字数: 5222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19741/j.issn.1673-4831.2018.0035

摘要

对固氮菌(Ensifer meliloti 1021)降解环境污染物苯甲腈途径及其相关酶进行了基因克隆和表达研究.高效液相色谱法(HPLC)分析显示En.meliloti 1021静息细胞可将苯甲腈降解为苯甲酰胺和苯甲酸.En.meliloti 1021全基因组中没有腈水解酶(nitrilase)基因,但有1个腈水合酶(nitrile hydratase)基因和12个酰胺酶(amidase)基因,因而其降解苯甲腈生成苯甲酸是经腈水合酶/酰胺酶途径.PCR扩增En.meliloti 1021的腈水合酶基因并在Esche-richia coli Rosetta(DE3)中成功表达.腈水合酶过表达的E.coli可在5 min内降解90％的浓度为97 mmol·L-1的苯甲腈,10 min基本检测不到苯甲腈,产生66.9 mmol·L-1苯甲酰胺.对12个酰胺酶进行了系统发育树分析,发现有4个酰胺酶与Genbank数据库中的苯甲酰胺水解酶(benzamide amidohydrolase)有较高的同源性.对这4个酰胺酶基因进行克隆表达以及酶活检测,发现只有登录号为CAC47672.1的酰胺酶有苯甲酰胺酶活性,可将苯甲酰胺水解为苯甲酸.该酰胺酶由434个氨基酸组成,分子量为47 k Da,等电点5.37.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	葛峰		2	0	0.0	0.0