山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测方法的建立

• 作者: 孙文超 张世亨 张红云 易驰喆 曹亮 汪伟 王茂鹏 苏姣秀 赵翠青 郑敏 闭璟珊 陈征 韦显凯 鲁会军 黄海鑫
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 Th1/Th2型细胞因子 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 138-144
• 页数: 7页
• 分类号: S852.42
• 字数: 3933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.230

摘要

目的 在mRNA水平对山羊Th1/Th2型细胞因子进行定量分析,建立山羊Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量检测方法.方法 根据GenBank山羊Th1(IL-2和IFN-γ)和Th2 (IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子基因保守序列设计引物,以标准阳性质粒为模板分别进行荧光定量PCR反应的标准曲线、溶解曲线建立.结果 山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测方法Ct值与标准品呈良好的线性关系,R2均大于0.985,所有稀释度标准品模板出现特异性熔解蜂;利用N1蛋白缺失的重组山羊痘病毒(△N1L株)与山羊痘AV41株感染山羊外周血淋巴细胞进行IL-4和IFN-γ mRNA表达水平检测,△N1L株与山羊痘AV41株均能能够刺激机体IL-4和IFN-γ细胞因子,但二者差异无统计学意义(t=3.333,P＞0.5).结论 本研究建立山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测,为山羊痘基因工程疫苗的研究奠定基础.