Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建

• 作者: 向勤 吴莎莎 谭拥军 谭桂湘
• 来源期刊: 湖南大学学报（自然科学版）
• 关键词: BstDNA聚合酶 重组蛋白 扩增 核酸检测
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 化学化工
• 页码范围: 98-106
• 页数: 9页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16339/j.cnki.hdxbzkb.2019.12.014

摘要

Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement的原核表达质粒,采用原核蛋白表达系统和His-Tag亲和纯化手段,制备成本低,活性高,特异性强的Bst DNA聚合酶.同时,针对特定的模板,对自制Bst DNA聚合酶的扩增反应进行了进一步优化,用不同的产物鉴定方法对扩增效果进行检测,并最终筛选出该酶最优的扩增反应条件为60 mM K+、30 mM(NH4)2SO4、pH为9.0.最后,验证了Bst DNA聚合酶能用于快速准确检测肺炎支原体、肺炎衣原体,降低了相关病原体核酸检测的成本,为之后核酸检测在基层医疗的更广泛应用提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭桂湘	湖南大学生物学院	8	7	2.0	2.0
2	谭拥军	湖南大学生物学院	14	25	3.0	4.0
3	向勤	湖南大学生物学院	4	2	1.0	1.0
4	吴莎莎	湖南大学生物学院	1	0	0.0	0.0