摘要:
目的 研究支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)新生大鼠肺组织长链非编码RNA H19(long non-coding RNA H19,LncRNA H19)表达及其对组蛋白甲基化转移酶2,即zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)调节作用,为阐明BPD肺上皮细胞-间质转化(epithelium-interstitial transformation,EMT)的病理机制奠定基础.方法 采用高浓度氧(吸入氧浓度为85%)诱导SD新生大鼠BPD模型(n=50),对照组吸入氧浓度为21% (n =50),两组分别于生后1d、3d、7d、14d、21 d采集肺组织,应用免疫组织化学、Western blot、荧光实时定量PCR等技术,观察EZH2蛋白的表达定位,检测EZH2蛋白表达水平及H19和EZH2的mRNA表达水平.结果 免疫组织化学可见EZH2蛋白在肺泡上皮细胞的细胞核与细胞浆中均有明显定位,模型组较对照组表达明显增强.同样Western blot结果显示,与对照组比较,模型组EZH2蛋白表达从1d开始增高(对照组0.196±0.030,模型组0.650±0.149,P<0.05),趋势持续到21 d(对照组0.934±0.215,模型组1.785±0.298,P<0.05).BPD模型组H19的mRNA表达水平从7d开始较对照组增加(对照组2.591±0.211,模型组3.558±0.093,P<0.05),EZH2 mRNA表达水平从3d开始较对照组增加(对照组1.246±0.015,模型组2.148±0.215,P<0.05),且基因水平随高氧暴露时间延长两组差异愈发明显.结论 在BPD的发生、发展中,肺组织H19与EZH2基因与蛋白水平表达均上调,且H19表达高峰先于EZH2,提示H19可能参与了EZH2介导的EMT引发肺发育不良的发生过程.