固定化胰蛋白酶整体小柱的制备及其用于微量蛋白质的快速酶解

• 作者: 康经武 郑蒙蒙 韩颖
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 液相色谱-串联质谱 制备 整体柱 蛋白质组学 固定化酶 胰蛋白酶
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1282-1290
• 页数: 9页
• 分类号: O658
• 字数: 7616字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2019.08039

摘要

发展了一种光引发聚合法制备固定化胰蛋白酶整体小柱的方法,以用于微量蛋白质的快速酶解.整体小柱由功能单体4-戊烯酸琥珀酰亚胺酯、甲基丙烯酸羟乙酯,交联剂季戊四醇三丙烯酸酯和三元致孔剂二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、十二醇在20μL的移液器吸头尖端原位聚合而成.形成整体柱后,胰蛋白酶分子通过氨基与琥珀酰亚胺酯反应实现固定化.系统研究了聚合溶液中活性酯含量与柱床体积对胰蛋白酶固载量的影响,评价了固定化酶整体小柱对标准蛋白细胞色素C和牛血清白蛋白的酶解效率,以及整体小柱的稳定性和重复性.结果表明,在离心辅助下,酶解过程可在10 min内完成,批次间具有良好的重复性.最后将固定化酶整体小柱应用于1×105个人急性早幼粒白血病(NB4)细胞与人急性T细胞白血病(Jurkat T)细胞的快速酶解,经纳升级液相色谱与高分辨质谱联用分析后鉴定得到2489个和2572个蛋白质.相比于溶液状态下的酶解,分别提高了2.2％和6.1％的蛋白鉴定数量,展现了其在蛋白组学研究中的应用潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	康经武	中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室	26	104	6.0	8.0
7	郑蒙蒙	中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
11	韩颖		1	0	0.0	0.0