GSTO1基因沉默对氟致成骨细胞自噬与凋亡的影响

• 作者: 徐慧淼 成小芳 李妍妍 杨镓蓉 王金明 赵阳飞 高宇凤
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 氟 成骨细胞 siRNA-GSTOI 自噬 凋亡
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 临床兽医
• 页码范围: 183-192
• 页数: 10页
• 分类号: S859.8
• 字数: 7279字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.01.021

摘要

为探讨氟致成骨细胞自噬和凋亡中GSTO1的作用机制,利用RNA干扰(RNAi)技术,抑制GSTO1基因在小鼠成骨细胞中表达,检测染氟小鼠成骨细胞中自噬和凋亡相关基因表达.针对小鼠成骨细胞GSTO1 mRNA序列设计、合成3对21核苷酸序列siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3);从3对序列中筛选最佳有效片段,然后检测不同质量浓度氟化钠(104、10 3、102、10、1mg·L-1)下GSTO1的mRNA转录,确定最佳氟浓度.试验分为空白对照组(control)、阴性对照组(NC-siRNA)、氟化钠组(1 mg· L-1)、沉默目的基因组(siRNA-GSTO1)和氟化钠加沉默目的基因组(NaF/siRNA-GSTO1),用RT-PCR技术检测成骨细胞自噬相关基因LC3、p62、Beclinl、Atg3、Atg5和凋亡相关基因BCL2、Caspase-3的转录,同时应用Western blot技术检测LC3、p62、Beclin1、Atg3和Atg5蛋白表达.结果显示:用HE、吉姆萨、碱性磷酸酶、茜素红四种染色法鉴定试验所用细胞为成骨细胞.确定试验模型中50 nmol·L-1为siRNA的最佳转染浓度,siRNA2为最佳沉默转染片段,NaF的最佳浓度为1 mg· L-1.成骨细胞染氟与GSTO1基因抑制均可使LC3、Beclinl、Atg5和BCL2基因转录显著升高,p62和Caspase-3基因转录显著下降;但与NaF组相比较,NaF/siRNA-GSTO1组LC3、Beclin1、和Atg5基因mRNA转录水平显著降低(P＜0.05),而p62和Caspase-3基因转录显著升高(P＜0.05).Western blot检测成骨细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1、Atg5和p62的表达与基因转录趋势完全一致.结果表明,低剂量氟与沉默GSTO1表达均可致成骨细胞自噬增强的同时凋亡减弱,GSTO1对低剂量氟致成骨细胞自噬增强与抑制凋亡有一定的协同效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王金明	山西农业大学动物科技学院	21	87	6.0	9.0
2	成小芳	山西农业大学文理学院	13	82	6.0	9.0
3	赵阳飞	山西农业大学动物科技学院	4	11	2.0	3.0
4	李妍妍	山西农业大学动物科技学院	4	6	2.0	2.0
5	徐慧淼	山西农业大学动物科技学院	3	4	2.0	2.0
6	高宇凤	山西农业大学动物科技学院	2	4	2.0	2.0
7	杨镓蓉	山西农业大学动物科技学院	2	2	1.0	1.0